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酶标板的使用除了无菌还要注意哪些

发布时间:2021-07-01      点击次数:77
   酶标板(ELISA PLATE)在酶联免疫吸附试验(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)中,参与免疫学反应的抗原、抗体、标记抗体或抗原的纯度、浓度和比例;缓冲液种类、浓度和离子强度、pH值和反应温度、时间等条件起着关键作用。
  根据底部不同,酶标板可分为平底、U型底平底、V型底三类。平底:底部读数平板与细胞培养用,折光率较低,适合用于上酶标仪读数。U型底:折光率较高,方便加样、吸样、混匀等操作, 也适用于不需上机读数、直接通过目测颜色深浅,可用于凝集。V型底:精确吸取样品和储存样品。
  酶标板的使用方法
  1、加样品:将标本稀释液加到包被板内,将需要检测的血清用PBS或生理盐水按照1:20的比例稀释后取10ul加入到酶标板的反应孔内。
  2、加对照:加入阴性对照3孔,阳性对照1孔,还有100ul的对照血清。
  3、进行温育:将反应板震荡,使样品充分的混匀,置于37℃的温箱或者水浴反应20分钟的时间。
  4、洗板:用蒸馏水将洗涤液15ml稀释至300ml的体积。手洗的时候应该将反应板孔内的容物倾出,将洗涤液注满反应孔的位置,然后放置30秒钟后用力甩去,这样的动作重复5次后开始拍干。机洗需要进行5次,每孔注入洗涤液200ul或者可以注满,然后停留30秒钟后吸尽拍干。
  5、加酶标工作液:在每孔内加入100ul的酶标工作液,放置到37℃的温箱中,反应20分钟后洗板5次,洗板的操作和上述步骤4是相同的。
  6、这是反应的最后一步,就是显色和终止反应:将底物50ul加到反应孔内,37℃条件下避光显色10分钟的时间。在每孔内加入终止液50ul混匀用以终止反应。
  酶标板的使用需要在无菌的条件下进行。在酶标板使用之前和之后都要认真的进行消毒和清洗,但是需要注意的是有的酶标板在消毒之前需要认真的阅读说明书,看是否可以进行高温消毒。
  作为载体的固相聚苯乙烯(Polystyrene)表面对抗原、抗体或抗原抗体复合物的吸附也起着重要作用。
  醇标板经表面改性处理后拥有带正电荷的氨基,其疏水键由杀水键取代。该类晦标板适合作为小分子蛋白的固相载体。使用合适的缓冲液和pH值,其表面可通过离子键与带负电荷的小分子结合。由于其表面的亲水特性和可通过其它交联剂共价结合的能力,可用于固定溶于 Triton-100、 Tween20等去污剂的蛋白分子。该类板的缺陷为由于降低了疏水性,一部分蛋白分子无法结合;此外,其表面需有效地封闭。由于亲水和共价的表面特性,使用的封闭液必须能够与非反应性氨基基团和所选择的交联剂中任何功能基团发生作用。
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